Coloração de Gram

A coloração de Gram é o método mais utilizado para diferenciação das espécies bacterianas, onde estas são divididas em dois grupos bem distintos: Bactérias Gram positivas e Gram negativas. Os fatores que definirão seu grupo será a sua coloração, caracterizada por propriedades químicas e físicas das paredes celulares.

A diferenciação é detectada pela quantidade de peptídeoglicano presente nas bactérias gram-positivas e nas bactérias gram-negativas. As bactérias gram-positivas corando-se de azul violeta, e as bactérias gram-negativas corando-se de vermelhas.

A coloração de Gram e um dos métodos mais importantes dentro dos laboratórios de análises clinicas e microbiologia. Nas análises clinicas é essencial o uso dessa técnica para obtenção dos resultados. Onde as bactérias caracterizadas como gram positivas ou gram negativas originadas de esfregaços de pus ou fluidos orgânicos permitem que o profissional do laboratório possa monitorar as infecções.

A coloração de gram e muito usada em análises microbiológicas para a identificação e caracterização da morfologia das bactérias.

Vale ressaltar que algumas bactérias não se coram ou coram-se fracamente.

Bactérias gram-positivas e gram-negativas, após a coloração de Gram. Fotos: Y_tambe / Wikimedia Commons ([1][2]) [CC-BY-SA 3.0]

 

Materiais

Lâminas para microscopia; óleo de imersão; lamínulas; microscópio; alça de platina; bico de Bunsen; tubo contendo solução com água esterilizada e corante: cristal de violeta.

Bactérias gram-positiva: lugol

• Estafilococcus aureus - Safranina
• Staphylococcus saprophyticus - Álcool 95%

Bactéria gram-negativa: gaze

• Escherichia coli - Pisseta água destilada

Procedimentos

1. Em uma lâmina, contendo esfregaço seco, cubra-o pingando gotas de violeta-de-metila e deixe agir por 15 segundos;
2. Adicione água ao esfregaço, em cima do violeta-de-metila, cobrindo toda a lâmina. Deixe agir por mais 45 segundos;
3. Após o tempo corrido, escorra o corante e lave o esfregaço em um filete de água corrente.  Cubra a lâmina com lugol ou Iodo de Gram e deixe por 60 segundos;
4. Escorra todo o lugol e lave em um filete de água corrente;
5. Aplique álcool etílico a 95%, ou acetona, para descorar a lâmina por 10 a 20 segundos;
6. Lave em um filete de água corrente;
7. Cubra toda a lâmina com safarina e deixe corar por aproximadamente 30 segundos;
8. Lave a lâmina em um filete de água;
9. Seque a lâmina com auxílio de um papel de filtro limpo ou deixe-a secar ao ar livre;
10. Aplique uma gota de óleo de imersão sobre o esfregaço e observe no microscópico com objetiva de imersão (100 X).

A técnica que consiste na coloração das bactérias apresenta diagnóstico clínico correto em 80% dos testes realizados, levando em consideração a simplicidade e velocidade da técnica, o número é extremamente positivo. Essa técnica ainda possui baixo custo e instalações simples.

Texto e técnica disponível em:

http://www.infoescola.com/bioquimica/coloracao-de-gram/