MÉTODO DE WILLIS

(Flutuação em Solução Saturada de Cloreto de Sódio)

Foi descrito por Willis em 1921.

Fundamento

 Flutuação de ovos de helmintos em uma solução saturada de NaCl em água.

Finalidade:

 É indicado na pesquisa de ovos “leves” de helmintos e não serve para cistos de protozoários e larvas de helmintos.

 É um método padrão para pesquisa de ovos de ancilostomídeos nas fezes.

 Exemplos de ovos leves: Ancylostoma duodenale, Necator americanus, ovos férteis de Ascaris lumbricoides, Hymenolepis nana e Trichuris trichiura.

▬   Variação da técnica:

1)    Colocar uma quantidade de fezes de aproximadamente 1 a 2 g coletada de várias partes do bolo fecal, em pequena cuba de vidro de 3 cm de diâmetro com capacidade aproximada de 20 mL. Completar ¼ da capacidade do recipiente com solução saturada de cloreto de sódio.

2)    Suspender as fezes na solução saturada salina até haver uma total homogeneização. Completar o volume do frasco com solução de NaCl.

3)    A lamínula deve ficar em contato com o menisco durante 30 a 45 minutos; não deverá haver formação de bolhas de ar entra a lamínula e a superfície do líquido. A gota contendo os ovos se adere à face inferior da lamínula.

4)    Remover a lamínula e inverter rapidamente a sua posição sobre uma lâmina.

5)    Examinar ao microscópio com objetiva de pequeno aumento.

Observações:

 Os ovos não flutuam na superfície do reagente quando a homogeneização do material fecal é incompleta, havendo uma imperfeita separação dos ovos e dos detritos fecais.

 Para a flutuação não se deve usar um tempo muito curto (menos de 30 minutos) ou muito longo (mais de 60 minutos). Nesse caso os ovos que flutuam na superfície podem descer para o fundo da pequena cuba (Suzuki, 1980).

TÉCNICA DE WILLIS ( Flutuação Espontânea )

·     Colocar aproximadamente 2 g de fezes num copo descartável.

·     Acrescentar aproximadamente 20 ml de água morna aos poucos.

·     Homogeneizar totalmente as fezes com o auxílio de um palito.

·     Transferir para um cálice afunilado coando em filtro próprio para fezes.

·     Transferir para um tubo de centrífuga e centrifugar a 2500 rpm por 02 minutos.

·     Desprezar o sobrenadante

·     Ressuspender o sedimento em sol. saturada de NaCl, completando o volume do tubo com esta solução até formar um menisco.

·     Colocar uma lâmina sobre a boca do tubo.

·     Deixar em repouso durante 15 a 45 minutos (não ultrapassar os 45 minutos, pois os ovos começam a descer).

·     Retirar a lâmina virando bruscamente.

·     Examinar ao microscópio.

Referênicia:

Neves, D.P. al., PARASITOLOGIA HUMANA. 11 ed. São Paulo Atheneu, 2005.  Zeibig, Elizabeth A. Parasitologia Clínica: Uma abordagem clínico laboratorial, Elsevier, 2014